皖仪科技离子色谱测定硫酸新霉素的含量
引言
硫酸新霉素是1949年从新霉素链霉菌的代谢产物中分离得到的混合物，含有A、B、C3个成分，其中新霉素B和C为主要成分，新霉素A仅微量。硫酸新霉素主要通过与细菌、核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成，从而达到抑制细菌的效果。然而新霉素全身用药有显著肾毒性和耳毒性，故仅限于口服或局部应用。因此主要用于治疗皮肤感染性疾病，新霉素口服极少吸收（大约在5％），在肠道内浓度很高，与其他抗生素混合口服可用于对肠道微生物群系的控制，适合于手术前的肠道消毒等。
硫酸新霉素目前中国药典中使用的是抗生素微生物检定法，该方法时间较长，无法满足大规模测试的需求，而在实际应用过程中，客户需要对不同时段发酵液，提取液，成品等进行测试，以判断工艺及方法是否符合要求。然而中国药典中的方法的时效性和局限性无法满足这一要求。
目前欧洲药典主要采用离子色谱安培检测法测试硫酸新霉素有效成分，而我国离子色谱法并未纳入到中国药典检测方法中，基于此，皖仪科技开发了一种离子色谱测试方法检测硫酸新霉素有效成分含量，样品前处理操作简单，测试准确性高，重现性好，不同组分间分离度良好，并且20分钟可以完成一次检测，可以满足客户大规模测试的要求，并且提高时效性，测试结果一致性，减少人为及系统误差。
1 实验方法
1.1测试条件
仪器：IC6600系列离子色谱仪配置安培检测器，柱后衍生；
色谱柱：氨基糖苷类专用色谱柱（4.6 mm×150mm）；
保护柱：氨基糖苷类专用保护柱（30 mm×4 mm）；
柱温：35℃；
流速：主泵1.0ml/min；副泵0.5ml/min
进样量：25μL；
检测器：安培检测器
1.2 使用试剂
淋洗液：量取20mL三氟乙酸和6mL浓度为500g/L的氢氧化钠使用纯水定容至1L容量瓶中，超声，抽滤。
柱后碱液：量取40mL浓度为500g/L氢氧化钠使用纯水定容至1L,超声，抽滤。
标样：硫酸新霉素标准样品样品：硫酸新霉素成品样品，硫酸新霉素发酵液样品注：
l 建议使用色谱级试剂，若是试剂纯度不够会使基线不平稳，使得部分杂质无法检出。
l 对发酵液进行测试时，因发酵液中含杂质较多，需要进行适当稀释，若是浓度过高会使待测样品中杂质含量过高，超出柱容量影响测试结果并且会损害色谱柱。
l 发酵液中因杂质较多需要进行前处理：离心，过滤等，以去除部分杂质以达到最佳的检测效果。若不进行前处理可能会对色谱柱造成堵塞，损害色谱柱寿命等情况。
1.3 标准曲线的制备
根据效价用纯水稀释标准样品硫酸新霉素效价分别为：10ug/mg，20ug/mg，40ug/mg，60ug/mg，80ug/mg，100ug/mg定容至100mL容量瓶中，即得。
表1 标准系列曲线浓度梯度表
2 测试结果
2.1 硫酸新霉素线性测试结果
依次移取10ug/mg、20ug/mg、40ug/mg、60ug/mg、80ug/mg、100ug/mg的系列标准工作曲线，按照1.1工作测试条件得到标准曲线线谱图多点重叠图如图1，硫酸新霉素在该色谱条件下线性相关系数R=0.9999，线性良好。
图1 硫酸新霉素梯度效价色谱图表2 线性方程
2.2 硫酸新霉素样品图与标准品谱图
在1.1的工作测试条件下条件下，对经过前处理的样品与标准品进行检测。标准品样品图谱如图2，成品样品如图3，发酵液样品如图4所示，可见无论是标准品还是样品图谱中的目标硫酸新霉素C、硫酸新霉素B离子峰形对称，分离度良好，最终得到样品中硫酸新霉素B、硫酸新霉素C的含量。
图2标准品测试谱图
图3 成品样品测试谱图
图4 发酵液样品测试谱图
2.3硫酸新霉素重复性测试结果
硫酸新霉素效价100ug/mg标连续6针重复图谱重叠图如下：测试结果：保留时间的RSD为0.051％~0.063％，峰面积保留时间RSD为0.223％，重复性良好，测试较为稳定。
图5 重复性测试谱图表3 重复性数据表
3 总结
本次采用皖仪科技离子色谱仪IC6600系列对硫酸新霉素样品进行系统适用性、标准曲线验证、重复性验证。测试结果峰形较好，线性良好，重复性满足要求，灵敏度高完全满足测试要求。
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